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H9c2細(xì)胞培養(yǎng)方法

大鼠心肌細(xì)胞H9C2
細(xì)胞描述:   
大鼠心肌細(xì)胞H9C2是來源于胚胎期BD1X大鼠心臟組織的亞克隆細(xì)胞系,表現(xiàn)很多骨骼肌細(xì)胞的特性。當(dāng)H9c2細(xì)胞匯合時(shí),細(xì)胞就會(huì)融合成多核的肌管并對(duì)乙酰膽堿刺激有反應(yīng),但該細(xì)胞缺少像心肌細(xì)胞一樣的節(jié)律性搏動(dòng)。此外,多項(xiàng)生化、電生理指標(biāo)的檢測(cè)也表明其具有骨骼肌的很多特點(diǎn)。由于來源于心臟,H9C2細(xì)胞作為心臟成肌細(xì)胞也用于心肌疾病的研究。
大鼠心肌細(xì)胞H9C2增殖能力取決于細(xì)胞取材、培養(yǎng)技術(shù)、培養(yǎng)條件等綜合因素。請(qǐng)按照正確的培養(yǎng)方法來解凍、傳代,以此保證細(xì)胞具備良好的增殖能力,方便您的后繼研究順利進(jìn)行。
貨號(hào) 規(guī)格 培養(yǎng)基 運(yùn)輸 保存
C0048 1×106個(gè)/管 DMEM+10% FBS 干冰運(yùn)輸 液氮保存

質(zhì)量控制:   
本細(xì)胞經(jīng)過了檢測(cè),不含有細(xì)菌、真菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原體。

培養(yǎng)條件:
37℃,5% CO2,PH值7.2~7.4,無菌恒溫培養(yǎng)。

用途:   
本產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用,不可應(yīng)用于治療等其他方面。

細(xì)胞相關(guān)操作(注意:細(xì)胞操作都需嚴(yán)格按照無菌操作)
收到復(fù)蘇好的貼壁細(xì)胞的處理方法:
1. 先從外包裝盒拿出細(xì)胞瓶,在細(xì)胞瓶表面噴一層酒精,并小心去掉封口膜;
2. 在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),并確定是否染菌,如有染菌,請(qǐng)立即拍照,并將細(xì)胞丟掉;
3. 將培養(yǎng)瓶置于37°C,5% CO2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6小時(shí);
4. 倒掉多余的培養(yǎng)基,留正常體積的培養(yǎng)基;
5. 重新將培養(yǎng)瓶置于37°C,5% CO2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜;
6. 第二天傳代。

收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代
1.當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上時(shí),給細(xì)胞傳代;
2.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
3.在超凈臺(tái)中,棄培養(yǎng)基,加入2-5mlPBS清洗細(xì)胞后,再加入1ml胰酶消化細(xì)胞;
4.顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓,有細(xì)胞開始脫離瓶壁時(shí),加入5ml培養(yǎng)基終止消化;
5.用移液器輕輕吹下瓶壁上剩余的細(xì)胞,并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞吹散;
6.將細(xì)胞移入離心管中,1000rpm離心5min;
7.棄上清,加入15-20ml的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T75培養(yǎng)瓶中或按適當(dāng)比例傳到T25瓶中(確保細(xì)胞貼壁后融合度在25-50%之間),細(xì)胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶),混勻細(xì)胞懸液,確保細(xì)胞均勻分布;
8.將培養(yǎng)瓶置于37°C,5% CO2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細(xì)胞凍存
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.消化細(xì)胞后給細(xì)胞計(jì)數(shù):
1)洗凈晾干血小板計(jì)數(shù)板和蓋玻片,將蓋玻片完全覆蓋計(jì)數(shù)區(qū);
2)充分混勻細(xì)胞,取少量(0.1-0.5ml)細(xì)胞懸液與等體積的染色液臺(tái)盼藍(lán)混合,移液器吹吸混合均勻,用移液器取20ul混合液從蓋玻片兩端(與中間凹槽平行的兩端)分別打入細(xì)胞,以細(xì)胞懸液剛好浸濕蓋玻片為佳;
3)顯微鏡下,數(shù)四個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)的總細(xì)胞數(shù),無活性細(xì)胞染成藍(lán)色,活細(xì)胞不被染色;
4)細(xì)胞密度=細(xì)胞總數(shù)/4×10000×2;
這里10000是不變的,因?yàn)橛?jì)數(shù)的細(xì)胞是在體積為1mm×1mm×0.1mm即10-4cm3計(jì)數(shù)池內(nèi),1cm3=1ml,將四個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)的細(xì)胞數(shù)除以4取平均數(shù),乘2是補(bǔ)償加等體積臺(tái)盼藍(lán)形成的稀釋。
5)細(xì)胞活性=活細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。
注:細(xì)胞密度高時(shí),可調(diào)整細(xì)胞懸液和臺(tái)盼藍(lán)的比例,計(jì)數(shù)時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可。
3.當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到傳代密度且細(xì)胞活性在90%以上時(shí),可以凍存細(xì)胞。
4.在超凈臺(tái)中將要凍存的細(xì)胞移入離心管,1000rpm離心5min。
5.棄上清,用90%培養(yǎng)液+10%DMSO的混合液重懸細(xì)胞,并調(diào)整細(xì)胞密度為1-3×106/ml。
6.將細(xì)胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。
7.將裝有細(xì)胞的凍存管放入程序降溫凍存盒,-20°C放1-2h后,-80°C過夜,然后快速轉(zhuǎn)移到液氮中。
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