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MDBK(牛腎細(xì)胞)細(xì)胞培養(yǎng)方法

傳代步驟:

棄去舊的生長液-->用無鈣鎂水(CMF)沖洗貼壁細(xì)胞數(shù)次(視細(xì)胞瓶的大小,3--5次)-->剩少許CMF,滴入 ATV 2--3滴-->搖勻細(xì)胞瓶中的液體,使ATV均勻的分布到瓶里的沒個地方-->放入37度二氧化碳溫箱中3--5min消化-->棄去ATV,加入生長液,拍打吸吹下細(xì)胞-->鏡下觀察-->分瓶-->作好記號,放入37度二氧化碳溫箱生長

細(xì)胞特點:該細(xì)胞生長力強,而且快速一般24h就可以張到80%,48h不傳就會變的很老,所以該細(xì)胞傳時要勤點;我感覺MDBK還是很好傳的,比以前我傳的ST、Vero細(xì)胞等要好傳一些,且不那么容易死亡,所以是我的一個比較好的選擇!該細(xì)胞適合接種皰疹病毒(如:偽狂犬病毒)!

BHK-21:棄除舊的培養(yǎng)液后---用緩沖液沖洗一遍----用0.22%的胰酶消化液消化約兩分鐘左右可以看到細(xì)胞像沙子一樣脫落-------趕緊倒掉胰酶加入含10%的牛血清培養(yǎng)液終止消化。但目前G內(nèi)能找到的BHK-21細(xì)胞大部分都有支原體感染,如果是好的BHK-21細(xì)胞能做到1比20的分種率。

補充一點關(guān)于BHK-21的培養(yǎng),先用少量胰酶沖洗一下,棄去,再用胰酶消化1min左右,效果會好一些

皮膚成纖維細(xì)胞和THP-1細(xì)胞:皮膚成纖維細(xì)胞是貼壁生長的。THP-1細(xì)胞是懸浮的。

由于我們實驗室養(yǎng)細(xì)胞的時間也不是很長,所以也只能說說自己平時的操作了。

先說皮膚成纖維細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞鋪滿瓶底,也就是細(xì)胞與細(xì)胞之間沒有間隙時,就可以傳代了。一般十天左右傳一代。先吸棄舊培養(yǎng)液,用D-Hanks液洗兩遍,再加入0.25%的胰酶,加入的量以能覆蓋瓶底為準(zhǔn)。加入后輕輕搖晃培養(yǎng)瓶使液體覆蓋瓶底,然后靜置兩分鐘左右,**好是能在顯微鏡下觀察,當(dāng)細(xì)胞之間出現(xiàn)間隙且有一部分細(xì)胞呈現(xiàn)圓形后即可。吸去胰酶,加入含血清培養(yǎng)液,搖晃瓶子使培養(yǎng)液覆蓋瓶底就行了。因為血清可以終止胰酶的消化。然后吹打瓶底各處使細(xì)胞脫落。再分瓶補加培養(yǎng)液。

THP-1細(xì)胞的傳代就比較簡單了??梢杂袃煞N傳代方法。如果鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)很好,沒有其它雜質(zhì)即細(xì)胞裂解物之類的,就可以采用直接傳代法。傳代前將細(xì)胞培養(yǎng)瓶直立一個半小時使細(xì)胞自然下沉。吸棄上層少量培養(yǎng)液約三分之一,將余下的培養(yǎng)液分成兩瓶,再分別補加培養(yǎng)液即可。如果鏡下觀察覺得培養(yǎng)液中有雜質(zhì)即可采用離心傳代法。如果細(xì)胞數(shù)目較多可以低速離心約600轉(zhuǎn)離心六分鐘,細(xì)胞可以沉淀下來而且可以去除細(xì)胞碎片之類的雜質(zhì)。如果覺得細(xì)胞數(shù)目不多比較寶貴,那就提高轉(zhuǎn)速可以1000轉(zhuǎn)離心六分鐘,這樣細(xì)胞損失很少但可能也有些雜質(zhì)會一起沉淀下來。離心后去除上清液,加入新的培養(yǎng)液吹打渾勻即可分瓶傳代了。
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